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液相色譜儀對流動相的要求

點擊次數(shù):6261 發(fā)布時間:2017-12-04
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下特點:

1 純度  流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜過濾)。溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累,會影響色譜柱的使用壽命。

2 溶解度  樣品的溶解度要適宜如果溶解度,如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉淀,不但影響純化分離,還會縮短柱子的使用壽命。

3 粘度 要低(應(yīng)<2cp) 粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì),降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。選擇沸點在100℃以下的流動相。

4 樣品易于回收。應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。

5 流動相  PH 采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,通過調(diào)節(jié)流動相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱堿,情況相反。分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

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